Isaac Clarke
Un especialista en sistemas e ingeniero espacial miembro de la tripulación del USG Kellion enviado para investigar y reparar la USG Ishimura. Por desgracia, quedarán atrapados en la pesadilla en que se ha convertido el Ishimura. Su verdadero objetivo es encontrar a su novia Nicole, una especialista en medicina a bordo de la nave, que le ha enviado una misteriosa llamada de auxilio. A través de esta aventura, descubrirá una conspiración que involucra a la Iglesia de la Uniología, el Gobierno Terrestre y antigua tecnología alienígena.
Kendra Daniels
La especialista en informática del Kellion enviada a la Ishimura para reparar el sistema de comunicaciones. Gracias a sus habilidades, es capaz de infiltrarse en los sistemas de la nave para apoyar a Isaac en la tarea de mantener el Ishimura en una pieza, dando instrucciones o abriendo el acceso a áreas bloqueadas. A consecuencia de los numerosos secretos que se van revelando conforme investigan la situación de la operación minera del Ishimura, comienza a desconfiar de Hammond, pero esto podría ser solo una fachada…
Zach Hammond
El jefe de seguridad de la Kellion. Su objetivo principal es completar la misión que le fue asignada sin importar nada; pero al mismo tiempo, su obstinación le trae conflictos con Kendra, quien lo encuentra sospechoso. Participa de una forma más activa en la tarea de reparar la Ishimura, pero conforme se da cuenta de su situación, va cambiando de parecer y al final decide enfocarse en sobrevivir e irse de la nave junto con sus compañeros. Sin embargo, esta no será una tarea sencilla…
Challus Mercer
Un médico parte de la tripulación de la USG Ishimura. Es un Uniólogo devoto y a causa de los horribles incidentes a bordo de la nave se ha vuelto completamente loco, rindiéndose completamente a su fanatismo. Para Mercer, todo lo sucedido en la nave es la voluntad de Dios. Su locura la ha llevado a creer que los Necromorfos son los sucesores naturales de la humanidad, y que su existencia es la prueba de la vida después de la muerte. Ha cazado y asesinado a otros miembros de la tripulación para ofrecer sus cuerpos a las criaturas, incluso ha conducido todo tipo de horribles experimentos en humanos. Los sobrevivientes del USG Kellion serán su próximo objetivo.
Terrence Kyne
El Director Científico a bordo de la Ishimura. A pesar de sufrir de una obvia inestabilidad mental, pide ayuda a los sobrevivientes del Kellion para detener la pesadilla que ha asolado a la Ishimura. Kyne intentó relevar al Capitán Matthius de su cargo durante la crisis de la colonia, pero en su lugar fue culpado de la muerte del capitán. Sin más guardias que lo vigilaran, se dedico a vagar por la nave siguiendo las alucinaciones sobre su esposa muerta, que le llevaron a encontrarse con Isaac y poner en marcha un plan para detener a los Necromorfos.
Nicole Brennan
La novia de Isaac y parte del personal médico del Ishimura. Poco antes de la misión, envió un vídeo pidiendo ayuda tras la infección en la nave, motivo por el cual Isaac Clarke aceptó salir en auxilio de la nave minera. Ahora le corresponde investigar su paradero.
Pandemonium 